蚯蚓溶解酶的凍干技術(shù)

蚯蚓纖溶酶具有直接水解纖維蛋白和激**纖維蛋白溶酶原成血纖維蛋白溶酶，有抗栓和溶栓作用。生物凍干機(jī)設(shè)備是利用生物真空冷凍干燥技術(shù)，進(jìn)行各種生物制品凍干、人參提取凍干、蛋白酶凍干、益生菌凍干、龜膏凍干、多肽凍干、花青素凍干、蚯蚓纖溶酶凍干等加工生產(chǎn)。其中蚯蚓纖溶酶凍干粉制作工藝是經(jīng)過一系列的前處理后采用真空冷凍干燥工藝，得到原有營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)的蚯蚓纖溶酶凍干粉。

蚯蚓纖溶酶凍干粉制造工藝具體如下：

1）制作蚯蚓粗粉：將活蚯蚓饑餓自然吐凈泥沙，清洗，風(fēng)干后低溫粉碎，再進(jìn)行過篩制成蚯蚓粗粉；

2）制作粗酶溶液：將蚯蚓粗粉用磷酸緩沖液PBS和氯化鈉溶液均勻后置于2~8℃冷柜靜置12小時(shí)，在經(jīng)過離心，得到上清液。再將上清液進(jìn)行水浴處理后進(jìn)行**次離心取上清液，在上清液中加硫酸銨達(dá)靜置后進(jìn)行第三次離心，得到蚯蚓纖溶酶粗酶溶液；

3）粗酶純化和修飾：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析，經(jīng)過沖液洗脫得到蚯蚓纖溶酶純酶。再加入活化的PEG修飾劑和硼酸緩沖液，進(jìn)行保溫反應(yīng)，在經(jīng)過磷酸緩沖液透析和離心進(jìn)行上清液純化，收集活性成分得到蚯蚓纖溶酶修飾酶；

4）蚯蚓纖溶酶冷凍干燥：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝盤，料厚8mm左右，進(jìn)行-45℃低溫冷凍300min，而后在35pa真空下，進(jìn)行一次干燥控溫范圍-30~10℃，升華干燥時(shí)間720min,除去大部分流離水，然后進(jìn)行解析干燥控溫范圍10~40℃，干燥運(yùn)行時(shí)間860min。經(jīng)中生物凍干機(jī)的終點(diǎn)判斷確定，凍干結(jié)束得到含水1%以內(nèi)的蚯蚓纖溶酶凍干粉。

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